Développement d’une méthodologie innovante pour la détermination de 6

Rapports scientifiques volume 13, Numéro d'article : 14172 (2023) Citer cet article

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La 6-thioguanine est un médicament immunosuppresseur, un analogue de la guanine, utilisé pour traiter la leucémie aiguë et les maladies inflammatoires de l'intestin. Une utilisation excessive de 6-thioguanine pendant le traitement clinique peut provoquer des effets secondaires. De plus, administrer une dose trop faible sera inefficace. Par conséquent, il existe un besoin crucial d’une approche rapide, sélective et systématique pour quantifier la 6-thioguanine dans les fluides corporels afin de soutenir une application clinique. Une méthode HPLC entièrement validée a été développée pour déterminer la 6-thioguanine dans des échantillons de sang total en utilisant le 5-bromouracil comme étalon interne. Les nucléotides de 6-thioguanine ont été libérés des érythrocytes par l'acide perchlorique, puis hydrolysés à 100 °C en thiopurine mère, la 6-thioguanine. Les paramètres de validation suivants de la méthode ont été déterminés : spécificité/sélectivité, plage de linéarité (479–17 118 ng/mL, R > 0,992), limites de détection (150 ng/mL) et de quantification (479 ng/mL), précision (− 5,6 < Biais < 14,7), répétabilité (CV 1,30–3,24 %), précision intermédiaire (CV 4,19–5,78 %), récupération de l'extraction (79,1–103,6 %) et transfert. En outre, la stabilité du médicament dans des échantillons de sang total dans diverses conditions de stockage a été étudiée. La méthode suggérée convient à la détermination de la 6-thioguanine dans des échantillons d’érythrocytes de sang total pour la surveillance du niveau de médicament, donc un dosage correct.

La 6-thioguanine (6-TG) est un analogue purique de la guanine ; plus précisément, il s'agit d'un dérivé soufré de la guanine1. La 6-TG appartenait à une famille de thiopurines et a été introduite en 1950 comme traitement de la leucémie. Cinquante ans plus tard, les cliniciens ont commencé à l'utiliser pour traiter les maladies inflammatoires de l'intestin, chez ceux qui n'avaient pas reçu d'azathioprine (AZA) ou de mercaptopurine (MP) en raison d'événements indésirables limitant la dose ou d'une réponse sous-optimale2, 3. Cependant, des inquiétudes concernant le profil d'hépatotoxicité ont été entravé par une utilisation généralisée, en particulier l’hyperplasie nodulaire régénérative (NRH)4. La 6-TG est également utilisée dans le traitement clinique du syndrome d'immunodéficience acquise, des maladies auto-immunes telles que le psoriasis et dans la chimiothérapie des leucémies aiguës, en particulier la leucémie myéloïde aiguë et la leucémie lymphoblastique aiguë5, 6. Le risque supplémentaire associé à la 6-TG peut être le développement de lymphomes et cancers de la peau, comme démontré dans le cas des thérapies AZA/MP et anti-TNF7, 8. Il est donc important de vérifier régulièrement le taux de 6-TG pour confirmer la bonne dose du médicament ou, en cas d'anomalie résultats, pour ajuster la dose. Les thiopurines, dont la 6-TG, ont un effet immunosuppresseur en incorporant leurs métabolites pharmacologiquement actifs, les nucléotides 6-thioguanine (6-TGN), dans les acides nucléiques9. Par conséquent, cela conduit à une inhibition de la prolifération des lymphocytes, notamment de leur rôle important dans l’induction de l’apoptose10. Bien que les mécanismes provoquant la résistance des cellules leucémiques à la 6-thioguanine soient actuellement mal compris11, il a été suggéré que la réduction ou l'absence de l'activité de l'hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transférase (HGPT) ainsi qu'une activité altérée de la thiopurine S-méthyltransférase (TPMT) stimulent la sensibilité et la résistance à cette substance. composés12. En outre, il a été démontré que des défauts dans le système de réparation des mésappariements d’ADN stimulent la résistance acquise à de nombreux composés pharmaceutiques anticancéreux, dont la 6-thioguanine13. La mesure des taux de métabolites érythrocytaires 6-TG aide à déterminer l’adéquation du dosage d’AZA et peut être utilisée pour optimiser la dose du traitement antimétabolite afin d’obtenir une réponse clinique améliorée sans induire de leucopénie14. L'association de l'infliximab et des thiopurines (telles que la 6-thioguanine) chez les patients atteints de maladies inflammatoires de l'intestin est plus efficace que la monothérapie. La mesure de l'activité TPMT est encouragée avant de commencer le traitement des patients avec des médicaments à base de thiopurine tels que la 6-thioguanine, permettant ainsi d'ajuster la dose de thiopurine ou d'éviter complètement le médicament15. Dans de nombreuses ethnies, les polymorphismes TPMT entraînent une diminution (prévalence de 10 %) ou une absence (0,3 %) de l'activité TPMT16. Les individus homozygotes ou hétérozygotes pour ces types de variation génétique peuvent présenter des niveaux accrus de métabolites TGN, augmentant ainsi le risque de toxicité médullaire d'origine médicamenteuse en raison de l'accumulation du médicament non métabolisé17. Des taux de 6-TGN supérieurs à 230 pmol/8 × 108 globules rouges ont été associés à de meilleurs résultats chez les patients sous monothérapie. Un taux de 6-thioguanine de 125 pmol/8 × 108 globules rouges ou plus peut suffire pour atteindre des taux thérapeutiques d'infliximab18. Généralement, des taux de 6-TGN supérieurs à 235 pmol/8 × 108 érythrocytes sont recommandés comme seuil thérapeutique pour les patients sous AZA ou 6-MP19. Un niveau sûr et thérapeutique se situe entre 500 et 800 pmol/8 × 108 globules rouges20. Pour le traitement par 6-TG chez les patients atteints de MII, aucun taux thérapeutique ou toxique précis de 6-TGN n'a encore été décrit. Cependant, l'hépatotoxicité, en particulier l'hyperplasie nodulaire régénérative (NRH) et la maladie veino-occlusive (VOD), est dose-dépendante et liée à des taux de 6-TGN supérieurs à 1 000 pmol/8 × 108 globules rouges21. La surutilisation du 6-TG pendant le traitement clinique peut avoir des effets secondaires extra-toxiques6. De plus, un sous-dosage sera inefficace. Par conséquent, une approche rapide et entièrement validée pour déterminer quantitativement la 6-TG dans les fluides corporels est essentielle pour faciliter son utilisation clinique. Actuellement, les tests immunologiques et la chromatographie liquide à haute performance (HPLC) sont des techniques répandues, pratiques et sensibles dans le suivi thérapeutique des médicaments22, 23.